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强筋健骨胶囊对AA大鼠的安全性研究
来源:陕西省中医药研究院 作者:谢人明 范引科 张红  发表时间:2012/8/15 14:38:51  浏览: 2635

谢人明1 范引科1 张红1(陕西省中医药研究院 710003)
刘兴旺2  丁美海2  杨军涛2  (西安安得药业有限责任公司710075)
[摘要]  目的:探讨强筋健骨胶囊对AA大鼠肝肾功能、血脂代谢、蛋白代谢的影响。方法:选择120只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、夏天无胶囊组、白芍总苷(TGP)胶囊组、甲氨蝶呤(MTX)组、强筋健骨胶囊高、中、低剂量组,每组15只。除正常对照组外其余各组大鼠右后足趾皮内注射0.1ml FCA致炎并诱发大鼠佐剂关节炎,对照组大鼠注射同等剂量的生理盐水。按给药方案各干预组造模前预防性给药4d,造模后给药治疗21d,每天测实验动物体质量,试验结束后解剖实验动物分离重要脏器,计算各脏器指数;经颈总动脉取血,测定血清中ALT、AST、T-Bil、ALP,UREA、CREA等指标,探讨强筋健骨胶囊对肝、肾功能的影响;测定血清中TP、ALB、GLO、ALB/GLO等指标,探讨强筋健骨胶囊对蛋白代谢的影响;测定T-chol、TG、HDL-TC、LDL-TC及LDL-TC/ HDL-TC等指标,探讨强筋健骨胶囊对血脂代谢的影响。结果:强筋健骨胶囊不影响实验动物体质量,MTX可显著降低实验动物体质量(p<0.01);与空白对照组比,强筋健骨胶囊各脏器指数无显著变化,并可修复佐剂性关节炎的脏器变化, 对肝肾功能各指标无显著影响。结论:强筋健骨胶囊对佐剂性关节炎肝肾功能、血脂代谢、蛋白代谢等无影响,在治疗风湿类疾病不但疗效确切,而且安全性高。
[关键词]    强筋健骨胶囊    安全性研究    佐剂性关节炎  肝肾功能  血脂代谢  蛋白代谢
近几年来,中药制剂对类风湿性关节炎的治疗体现出较好的临床效果,但随之而来的是用药安全的问题。强筋健骨胶囊具有祛风除湿,强筋壮骨的功效,临床用于类风湿性关节炎等疾病的治疗取得了较好疗效,现以佐剂性关节炎(rheumatiod arthritis, AA)大鼠为实验动物,分析研究强筋健骨胶囊的安全性。
1  实验材料
1.1       实验动物 
清洁级雄性Sprague-DawIey(SD)大鼠120只,购于第四军医大学实验动物中心,许可证号:SCXK-(军)-2007-007,体质量160~180g,正常饲养。
1.2 试验药  
强筋健骨胶囊(国药准字 Z20050802,西安阿房宫药业有限公司生产,组方药物有制川乌、制草乌、制马钱子、制半夏、制天南星、石斛、川牛膝、党参、木瓜、钩藤、续断、陈皮、百草霜、礞石);白芍总苷胶囊(TGP,国药准字 H20055058,宁波立华制药有限公司生产);夏天无胶囊(国药准字 Z20080112,赤峰市天奇制药有限公司生产);甲氨喋呤片(MTX,国药准字 H31020644,上海信谊药厂有限公司生产);弗氏完全佐剂(FCA,美国Sigma公司)。
1.3  实验仪器  数显游标卡尺(精密度 0.01mm)。
实验方法
2.1  实验分组及给药剂量 
将120只雄性SD大鼠随机分为8组,每组15只。空白对照组(NS);模型组;白芍总苷胶囊(TGP)组(0.90g·kg-1·d-1);夏天无胶囊组(2.1g·kg-1·d-1);甲氨蝶呤(MTX)组(0.5mg·kg-1·d-1);强筋健骨胶囊高(1.8g·kg-1·d-1)、中(0.90g·kg-1·d-1)、低(0.45g·kg-1·d-1)剂量组。
2.2  大鼠AA模型的建立及给药
除NS组外其余各组大鼠右后足趾肉垫皮内注射0.1mlFCA致炎[1],NS组大鼠注射同等剂量的生理盐水。实验开始时,每天称量各实验动物的体质量,按照表1剂量灌胃给药,NS组、模型组每日给予生理盐水灌胃,各组大鼠造模前先预防性给药4d,造模后继续给药21d。
2.3  重要指标的测定
造模第21d给药后禁食12h,第22d全部动物以10%乌拉坦1.0g/kg腹腔注射麻醉,颈总动脉采集全血3~5ml,静置30min,3000r/min离心10min,吸取上部血清,-80℃保存。采用ELISA法检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬酸氨基转移酶(AST)、AST/ALT、总胆红素(T-Bil)、碱性磷酸酶(ALP)、尿素(UREA)、肌酐(CREA)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLO)、ALB/GLO、总胆固醇(T-Chol)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-TC)、低密度脂蛋白(LDL-TC)、LDL-TC/HDL-TC、血糖(Glu)、磷酸肌酸激酶(CK)等指标含量,用以衡量强筋健骨胶囊对肝肾功能、血脂代谢、蛋白代谢、能量代谢的影响。
2.5  重要脏器指数的测量
造模第21d给药后禁食12h,第22d全部动物以10%乌拉坦1.0g/kg腹腔注射麻醉,剖离各脏器指数并称重,计算脏器指数[脏器指数=100×脏器重量(g)/体重(g)] 。
2.6  数据处理
应用SPSS13.0软件进行统计分析,结果均以 ±s表示,组间比较进行t检验,以p<0.05为有显著性差异。
结果
3.1  强筋健骨胶囊对AA大鼠体质量的影响
AA大鼠体质量有下降趋势,但无统计学意义。强筋健骨胶囊对体质量无显著影响,MTX可显著降低实验动物体质量(p<0.01)。见表1:
表1 强筋健骨胶囊对大鼠佐剂性关节炎体质量的影响( ±s)
分组
动物
剂量(g/kg)
给药前体重
给药后体重
d6
d12
d18
d22
空白对照组
15
 
178.4±21.6
218.1±15.2 ◆◆
259.1±22.4 ◆◆
280.8±29.6 ◆◆
289.3±31.5 ◆◆
模型组
15
 
177.8±11.7
217.7±15.9 ◆◆
249.5±21.0 ◆◆
262.8±35.2 ◆◆
266.9±25.4 ◆◆
强筋健骨胶囊
15
0.45
176.6±14.7
210.2±18.2 ◆◆
243.8±23.9 ◆◆
272.2±27.0 ◆◆
275.2±27.9 ◆◆
强筋健骨胶囊
15
0.9
182.2±19.9
211.0±23.3 ◆◆
246.2±35.5 ◆◆
269.9±42.6 ◆◆
277.6±43.8 ◆◆
强筋健骨胶囊
15
1.8
182.8±11.6
205.9±16.2 ◆◆
247.0±21.1 ◆◆
249.0±24.9 ◆◆
259.6±26.6 ◆◆
夏天无胶囊组
15
2.1
183.4±16.3
211.6±14.3 ◆◆
242.0±16.1 ◆◆
271.8±18.8 ◆◆
262.8±20.8 ◆◆
TGP组
15
0.9
184.4±16.6
210.7±21.2 ◆◆
239.0±25.9 ◆◆
266.5±30.3 ◆◆
265.3±32.7 ◆◆
MTX组
15
0.005
179.8±15.2
145.8±9.6△△**▲▲★★
165.1±15.3△△**▲▲★★
191.9±23.7△△**▲▲★★
183.5±28.8△△**▲▲★★
注:组间进行t检验,与空白对照组比较p<0.05,△△p<0.01;与模型组比较*p<0.05,**p<0.01;与夏天无组比较p<0.05, ▲▲p<0.01;与TGP组比较p<0.05, ★★p<0.01;与MTX组比较p<0.05, ◆◆p<0.01。
3.2  强筋健骨胶囊对AA大鼠重要脏器指数的影响
AA大鼠肝脏指数显著降低(p<0.05),脾脏指数、肺脏指数显著升高(p<0.05),肾脏指数有下降的趋势;强筋健骨胶囊可显著降低脾脏指数(p<0.05,p<0.01),有升高肺脏指数、肾脏指数的趋势。TGP显著升高肾脏指数(p<0.05),与对照组比,显著升高脾脏指数(p<0.01);夏天无显著降低肺脏指数(p<0.05);MTX显著升高心、肝、脾、肾、脑、肾上腺、睾丸等指数(p<0.01),显著降低附睾指数、精索前列腺指数(p<0.05),对肺脏指数、胸腺指数有升高的趋势。见表2、表3:
表2强筋健骨胶囊对佐剂关节炎大鼠重要脏器指数的影响( ±s)
分组
剂量
(g/kg)
心脏指数
(g/100g)
肝脏指数
(g/100g)
脾脏指数
(g/100g)
肺脏指数
(g/100g)
肾脏指数
(g/100g)
脑指数
(g/100g)
空白对照组
-
0.30±0.05◆◆
2.63±0.13*◆◆
0.15±0.02*★★◆◆
0.63±0.16*
0.66±0.04◆◆
0.68±0.04 ◆◆
模型组
-
0.31±0.04◆◆
2.37±0.34★★◆◆
0.21±0.08◆◆
0.88±0.32
0.62±0.07★◆◆
0.65±0.06 ◆◆
强筋健骨胶囊
0.45
0.30±0.03◆◆
2.38±0.14△△▲▲★★◆◆
0.14±0.02**★★◆◆
0.70±0.22
0.64±0.05★◆◆
0.66±0.06 ◆◆
强筋健骨胶囊
0.90
0.31±0.04◆◆
2.57±0.31★◆◆
0.15±0.03*★★◆◆
1.23±1.30
0.63±0.07★◆◆
0.63±0.07 ◆◆
强筋健骨胶囊
1.80
0.30±0.02◆◆
2.54±0.19★◆◆
0.16±0.03*★★◆◆
0.75±0.26
0.67±0.05*◆◆
0.64±0.08 ◆◆
夏天无胶囊组
2.10
0.30±0.05◆◆
2.63±0.13*◆◆
0.15±0.02*★★◆◆
0.63±0.16*
0.66±0.04◆◆
0.68±0.04 ◆◆
TGP组
0.90
0.30±0.05◆◆
2.86±0.42**
0.22±0.04△△▲▲◆◆
0.68±0.18
0.69±0.06*◆◆
0.63±0.11 ◆◆
MTX组
0.005
0.36±0.03△△**▲▲★★
3.22±0.34△△**▲▲
0.33±0.08△△**▲▲★★
0.85±0.49
0.84±0.06△△**▲▲★★
0.93±0.15△△**▲▲★★
注:组间进行t检验,与对照组比较p<0.05,△△p<0.01;与模型组比较*p<0.05,**p<0.01;与夏天无组比较p<0.05, ▲▲p<0.01;与TGP组比较p<0.05, ★★p<0.01;与MTX组比较p<0.05, ◆◆p<0.01。
表3强筋健骨胶囊对佐剂关节炎大鼠重要脏器指数的影响( ±s)
分组
剂量
(g/kg)
胸腺指数
(g/100g)
肾上腺指数
(mg/100g)
睾丸指数
(g/100g)
附睾指数
(g/100g)
精索前列腺指数
(g/100g)
空白对照组
-
135.28±29.70
13.30±2.17◆◆
0.97±0.21◆◆
0.31±0.10
0.51±0.15
模型组
-
120.14±27.67
14.47±6.59
0.98±0.14◆◆
0.33±0.10
0.53±0.17
强筋健骨胶囊
0.45
125.28±25.07
14.07±3.66
0.95±0.20◆◆
0.32±0.11
0.50±0.14
强筋健骨胶囊
0.90
126.95±35.24
13.93±4.99
0.98±0.17◆◆
0.31±0.06◆◆
0.49±0.25
强筋健骨胶囊
1.80
133.02±29.97
15.47±2.15
0.97±0.16◆◆
0.28±0.04
0.57±0.16◆◆
夏天无胶囊组
2.10
109.97±33.34
13.30±2.17
0.97±0.21◆◆
0.31±0.10
0.51±0.15
TGP组
0.90
111.00±23.24
14.51±3.21
1.02±0.19◆◆
0.28±0.06
0.47±0.14
MTX组
0.005
147.42±63.03
19.17±5.29△△
1.27±0.16△△**▲▲★★
0.25±0.02*
0.38±0.10*
注:组间进行t检验,与空白对照组比较p<0.05,△△p<0.01;与模型组比较*p<0.05,**p<0.01;与夏天无组比较p<0.05, ▲▲p<0.01;与TGP组比较p<0.05, ★★p<0.01;与MTX组比较p<0.05, ◆◆p<0.01。
3.4  强筋健骨胶囊对AA大鼠肝、肾功能的影响
AA大鼠ALT显著降低,AST有降低趋势,AST/ALT、T-Bil、UREA有升高趋势;强筋健骨胶囊可显著降低血清UREA的含量(p<0.05,p<0.01),有升高AST、ALT的趋势;夏天无显著降低血清ALT、ALP、UREA、CREA的含量(p<0.05,p<0.01),显著升高AST/ALT,有降低AST的趋势;TGP显著升高T-Bil,显著降低ALT、AST/ALT、UREA、CREA(p<0.05,p<0.01);MTX显著升高ALP,显著降低ALT、AST/ALT、UREA、CREA的含量(p<0.05,p<0.01)。见表4:
表4 强筋健骨胶囊对佐剂性关节炎大鼠血清肝、肾功能的影响( ±s)
分组
剂量(g/kg)
AST(U/L)
ALT(U/L)
AST/ALT
T-Bil(μmol/L)
ALP(U/L)
UREA(mmol/L)
CREA(μmol/L)
空白对照组
 
175.93±34.4
50.43±14.41*▲▲★★◆◆
3.74±1.21▲▲★◆
1.56±0.37★★
188.43±45.69◆◆
6.13±0.93▲▲★★◆◆
46.64±4.58▲▲★★◆◆
模型组
 
163.40±31.59
38.73±8.11▲▲
4.33±0.89
1.69±0.35★★
189.07±28.94◆◆
6.71±1.35▲▲★★◆◆
45.40±6.83▲▲★★◆◆
强筋健骨胶囊
0.45
177.47±27.71
41.07±8.34▲▲◆◆
4.42±0.77
1.67±0.16★★
175.07±30.47◆◆
4.43±0.75△△**
39.20±2.86△△*★◆◆
强筋健骨胶囊
0.9
173.71±54.75
38.36±11.01
4.52±0.70
1.48±0.54★★
178.14±34.81◆◆
5.42±1.31*▲▲
40.71±3.65△△*★★◆◆
强筋健骨胶囊
1.8
175.67±35.19
44.87±19.18
4.29±1.23
1.68±0.33★★
176.73±35.51◆◆
4.60±0.6△△**
41.53±2.7△△▲▲★★◆◆
夏天无胶囊
2.1
153.13±28.02
30.00±5.87△△**
5.24±1.20△△*
1.85±1.52★★
166.73±26.19*◆◆
4.22±0.58△△**
38.13±2.5△△**
TGP组
0.9
160.20±30.27
35.53±9.61△△
4.64±0.81
7.62±2.88△△**▲▲◆◆
182.20±31.07◆◆
4.50±0.59△△**
36.80±2.74△△**
MTX组
0.005
155.85±23.78
32.62±6.06△△
4.90±0.96
1.44±0.18★★
244.54±52.34△△**
4.98±1.02△△**
35.31±2.89△△**
注:组间进行t检验,与空白对照组比较p<0.05,△△p<0.01;与模型组比较*p<0.05,**p<0.01;与夏天无组比较p<0.05, ▲▲p<0.01;与TGP组比较p<0.05, ★★p<0.01;与MTX组比较p<0.05, ◆◆p<0.01。
3.5  强筋健骨胶囊对佐剂性关节炎大鼠蛋白代谢的影响
AA大鼠血清ALB、ALB/GLO显著下降(p<0.01),GLO有升高的趋势;强筋健骨胶囊显著降低血清GLO(p<0.01),显著升高ALB/GLO(p<0.01),高、低剂量组显著升高血清ALB(p<0.01);夏天无组可显著降低血清TP、GLO(p<0.01),显著升高ALB(p<0.05);TGP显著升高ALB、ALB/GLO(p<0.01),显著降低GLO(p<0.01);MTX显著升高ALB、ALB/GLO、显著降低GLO(p<0.05,p<0.01)。见表5:
表5   强筋健骨胶囊对佐剂性关节炎大鼠蛋白代谢的影响( ±s)相比
分组
剂量(g/kg)
TP(g/L)
ALB(g/L)
GLO(g/L)
ALB/GLO
空白对照组
 
63.78±3.49 ▲▲
30.73±1.25**▲▲
33.05±3.48▲▲
0.94±0.10**
模型组
 
63.05±3.04 ▲▲
25.97±2.67△△★★◆
37.08±2.31▲▲★★◆◆
0.71±0.09△△▲▲★★◆◆
强筋健骨胶囊
0.45
61.49±2.33 ▲▲
29.34±1.01△△**
32.15±2.22**
0.92±0.07**
强筋健骨胶囊
0.9
61.09±3.09
27.51±1.61△△★★
33.58±2.49**▲▲
0.83±0.08△△**▲▲★★◆◆
强筋健骨胶囊
1.8
64.54±3.02 ▲▲
30.21±1.30**▲▲
34.33±2.50**▲▲
0.88±0.07**
夏天无胶囊
2.1
58.61±3.73△△**
28.08±1.71△△*★★
30.53±2.51△△**
0.93±0.06**
TGP组
0.9
62.01±3.45
30.13±1.90**▲▲
31.88±2.27**
0.94±0.07**
MTX组
0.005
60.72±4.67
28.92±3.00*
31.80±4.00**
0.92±0.17**
注:组间进行t检验,与空白对照组比较p<0.05,△△p<0.01;与模型组比较*p<0.05,**p<0.01;与夏天无组比较p<0.05, ▲▲p<0.01;与TGP组比较p<0.05, ★★p<0.01;与MTX组比较p<0.05, ◆◆p<0.01。
3.6  强筋健骨胶囊对AA大鼠血脂代谢的影响
AA大鼠T-chol 、TG、HDL-TC有降低趋势,LDL-TC/HDL-TC又升高趋势;强筋健骨胶囊有升高T-chol 、TG、HDL-TC的趋势,有降低LDL-TC/HDL-TC的趋势;夏天无显著升高HDL-TC、显著降低LDL-TC、LDL-TC/HDL-TC(p<0.05,p<0.01);TGP显著降低T-Bil、TG、LDL-TC、LDL-TC/HDL-TC(p<0.05,p<0.01);MTX显著升高T-chol、HDL-TC,显著降低LDL-TC/HDL-TC(p<0.05)。见表6。
表6  强筋健骨胶囊对佐剂关节炎大鼠血脂代谢的影响( ±s)
分组
剂量
(g/kg)
T-Chol
(mmol/L)
TG
(mmol/L)
HDL-TC
(mmol/L)
LDL-TC
(mmol/L)
LDL-TC/HDL-TC
对照组
-
1.55±0.15▲▲★★
0.93±0.28▲▲★★◆◆
1.01±0.12
0.54±0.07▲▲★★
0.54±0.09▲▲★★◆
模型组
-
1.33±0.29
0.70±0.18★◆
0.83±0.18◆◆
0.50±0.14★★
0.62±0.13▲▲★★◆◆
强筋健骨胶囊
0.45
1.56±0.17▲▲★★
0.76±0.27★★◆
1.04±0.08**★★
0.52±0.13★★
0.50±0.13*★★
强筋健骨胶囊
0.90
1.37±0.17△△★◆
0.76±0.19★★◆
0.93±0.15
0.44±0.08△△★★
0.49±0.11*★★
强筋健骨胶囊
1.80
1.57±0.20▲▲★★
0.85±0.21▲▲★★◆◆
1.08±0.16★★
0.49±0.07★★
0.45±0.07△△**★★
夏天无胶囊组
2.10
1.37±0.16△△★◆
0.64±0.14△△
0.96±0.10*
0.41±0.08△△*★★
0.43±0.08△△**★★
TGP组
0.90
1.17±0.22△△◆◆
0.54±0.19△△
0.89±0.16◆◆
0.28±0.09△△**▲▲◆◆
0.32±0.08△△**▲▲◆◆
MTX组
0.005
1.67±0.42*★★
0.56±0.14△△
1.15±0.30**★★
0.52±0.14★★
0.46±0.08**★★
注:组间进行t检验,与空白对照组比较p<0.05,△△p<0.01;与模型组比较*p<0.05,**p<0.01;与夏天无组比较p<0.05, ▲▲p<0.01;与TGP组比较p<0.05, ★★p<0.01;与MTX组比较p<0.05, ◆◆p<0.01。
3.7  强筋健骨胶囊对AA大鼠糖代谢的影响
AA大鼠血清Glu含量显著升高(p<0.01);MTX显著升高Glu(p<0.01)。见表7
表7  强筋健骨胶囊对佐剂关节炎大鼠血糖、磷酸肌酸激酶的影响( ±s)
分组
剂量
(g/kg)
Glu
(mmol/L)
CK
(U/L)
对照组
-
4.01±0.54**▲▲★★◆◆
2735±1489
模型组
-
5.45±1.09△△▲▲◆◆
2113±419
强筋健骨胶囊
0.45
5.15±1.41▲▲◆◆
2954±1571
强筋健骨胶囊
0.90
5.99±1.64△△
1976±1194
强筋健骨胶囊
1.80
5.05±0.90△△▲▲
2201±497
夏天无胶囊组
2.10
6.25±1.30△△
2378±594
TGP组
0.90
6.05±1.41△△
2428±540
MTX组
0.005
7.11±1.60△△**
2274±544
注:组间进行t检验,与空白对照组比较p<0.05,△△p<0.01;与模型组比较*p<0.05,**p<0.01;与夏天无组比较p<0.05, ▲▲p<0.01;与TGP组比较p<0.05, ★★p<0.01;与MTX组比较p<0.05, ◆◆p<0.01。
3、结论与讨论
本研究结果显示,强筋健骨胶囊可以改善AA大鼠出现的肝脏指数降低,脾脏指数、肺脏指数升高的现象。强筋健骨胶囊对AST、ALT、T-Bil、ALP、CREA等均无影响,说明强筋健骨胶囊不具有肝肾毒性。强筋健骨胶囊对血清总蛋白(TP)无影响,但可升高血清白蛋白、降低血清球蛋白,强筋健骨胶囊又升高高密度脂蛋白,降低低密度脂蛋白的作用,对血清总胆固醇与甘油三酯无显著影响。所以,强筋健骨胶囊对肝肾功能、血脂代谢、蛋白代谢基本无影响。甲氨蝶呤可显著降低实验动物体质量,免疫抑制剂白芍总苷脾脏指数显著升高,T-Bil明显升高,对血脂代谢有明显毒性。之前有研究发现,强筋健骨胶囊对AA鼠有明显的治疗作用,可见本药在风湿性疾病的治疗中表现出疗效确切、而且安全性高,可适用于糖尿病患者,并且有预防动脉硬化的作用。
参考文献
1  冯芳,丁志建,刘俊.佐剂性关节炎大鼠模型的实验研究[J].天津药学,2004,16(2):1-4.

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